根据金域检验学院2024年工作安排，10月22日，由学院研究生会主办的2024年第五期研究生学术沙龙活动在番禺校区科技大楼328会议室如期举行。学院科研办主任王立富教授、李珍老师，2022级、2023级和2024级研究生参加本次学术沙龙活动。本次学术沙龙活动分为两个部分，第一部分是实验技术分享，第二部分是文献分享。

首先是实验技术交流环节，由蒋清杨同学分享微流控芯片的制作。微流控芯片是指在微型结构中精确处理和操控微量液体的一种芯片，在生物医药领域被广泛应用。微流控芯片的优势有高自动化程度、高效率、高通量、微型化、低成本等。芯片制作分四步。第一步是微流体通道的设计：使用专用软件如AutoCAD、lllustrator、L-Edit等设计微流体通道。第二步是光刻法加工微流体模具：在硅片上以1000 r/min的速度旋涂负光刻胶30 s，之后在95°C烘烤3 min。然后将具有微通道图案的光掩模暴露于紫外光下，接着模具在溶剂中显影，以去除末固化的光刻胶，最后模具在200°C下烘烤40 min。第三步是浇注：制备聚二甲基硅氧烷（PDMS）预聚体，将PDMS预聚体浇注在模具上，然后在85°C的热板上固化25 min。第四步是组装：在组装前，先用冲孔机创建进、出端口，并用玻片挤压排除气泡，接着将阵列层和通道层手动对齐并挤压进行组装，最后将其放在85°C下烘烤12 h。

吴俊伟同学结合自己的实践经验，与大家分享了肺泡灌洗液的采集技术。肺泡灌洗液 (Bronchoalveolar Lavage Fluid, 简称BALF)的采集是研究呼吸系统及其病变的一种重要的动物实验技术。BALF含有呼吸道及肺部深处多种生化因子、炎症介质和免疫细胞等，为动物实验研宄提供重要的评价指标和参考依据。通过评判BALF成分指标，可以检查小鼠在肺部疾病下的各种病理生理状态。

杨兰梦茜同学向大家介绍了扫描电子显微镜及细胞爬片制样技术。贴壁细胞爬片扫描电镜制样分细胞培养、细胞爬片清洗、前固定、漂洗、脱水、置换、干燥等步骤。需要注意的是，在脱水到置换这一步骤中，无水乙醇吸干后须马上加入置换液，动作要快，不能让爬片干燥。扫描电子显微镜的操作步骤则分为开机、放样品、观察样品、保存图像这几步。其中，将细胞爬片放在样品底座上后要进行喷晶处理（镀膜）以提高导电性，避免电荷积累，增强信号对比度，防止样品损坏，使成像更清晰和稳定。随后杨兰梦茜同学分享了自己在做该实验时的一些操作注意事项以及经验，同学们都受益匪浅。

接着，由张浩名同学带来微滴数字PCR技术分享。微滴数字PCR主要分为三个步骤：分散、扩增及信号检测。它有两个优势：绝对定量和低检测浓度。数字PCR (ddPCR)通过将样本分割成独立反应单元，并直接计算PCR阳性孔的比例来绝对定量DNA含量。这种方法无需标准曲线，因而具有更高的可重复性和准确性。另一方面，ddPCR提供更稳定的结果，对低浓度样品更灵敏。样品分配将目标序列集中在微反应单光内，减少模板竞争。

第二部分是文献分享。首先由魏坛、吴家航、朱东波、魏坛、高鹏飞及吴旭小组汇报发表于Autophagy杂志的文章《Regulation of RB1CC1/FIP200 stability and autophagy function by CREBBP-mediated acetylation in an intrinsically disordered region》。文章从诱导自噬起始所必须的复合物的一个组成部分RB1CC1入手，说明了该蛋白质的第276号位的赖氨酸被CREB结合蛋白乙酰化后，能够抑制其泛素依赖性降解，稳定RB1CC1蛋白质，使其能够通过其蛋白质N端的内在无序序列IDR区域发挥液液相分离LLPS，进而促进自噬体的形成。

第二篇是由肖俊聪、伍圣祯、高桃桃、黄园尹、丘浩然及牛冰艳小组带来有关尿路感染的文献汇报，题为《Neutrophil extracellular traps protect the kidney from ascending infection and are required for a positive leukocyte dipstick test》。文章的作者在分析健康人体尿液细胞外囊泡时意外发现了中性粒细胞胞外捕获物（NETs），并对其功能展开研究。在离体人尿液模型中，NET与尿调蛋白相互作用以形成截留细菌的网络并杀菌；在膀胱炎与肾盂肾炎小鼠模型中，抑制PADI4阻断NETosis后，导致小鼠膀胱炎进展为肾盂肾炎，表明尿中性粒细胞NETosis可防止细菌上升进入肾脏。此外，对英国生物库数据的分析显示，在多个全基因组关联研究中与类风湿性关节炎风险增加相关的PADI4遗传变异与UTI易感性降低一致相关。最后，尿试纸白细胞酯酶试验不能检测长期以来假设的中性粒细胞绝对计数，但能特异性检测发生NETosis的中性粒细胞。这些发现强调了NETosis在预防尿路上行感染中的作用。

活动中，老师和同学们积极进行互动交流和探讨，同学们也表示学术沙龙活动聚焦学术前沿，拓宽了大家的学术视野，丰富了专业知识，收获颇多。金域检验学院研究生会再次感谢大家积极参与此次活动，并希望以后学术沙龙系列活动能够为研究生们创造学术交流的机会，促进优秀科研成果的交流。最后此次学术沙龙活动在热烈的气氛中圆满落下帷幕。